Яке аз бартариҳои асосии фарҳанги ҳуҷайра ин қобилияти идора кардани химияи физикии таҷдиди ҳуҷайра (яъне ҳарорат, рН, фишори осмотикӣ, шиддати O2 ва CO2) ва муҳити физиологӣ (яъне гормонҳо ва консентратсияи маводи ғизоӣ) мебошад.Илова ба ҳарорат, муҳити фарҳанг аз ҷониби муҳити афзоиш назорат карда мешавад.
Гарчанде ки мухити физиологии маданият мисли мухити физики ва химиявии он равшан нест, хубтар дарки таркиби хуноба, муайян намудани омилхои афзоиш, ки барои афзоиш заруранд ва хубтар дарк намудани микромухити хучайрахо дар маданият мебошад.(Яъне таъсири мутақобилаи ҳуҷайра бо ҳуҷайраҳо, диффузияи газ, мутақобила бо матритса) ҳоло имкон медиҳад, ки хатҳои муайяни ҳуҷайра дар васоити бидуни хуноба парвариш карда шаванд.
1.Муҳити фарҳангӣ ба афзоиши ҳуҷайраҳо таъсир мерасонад
Лутфан қайд кунед, ки шароити фарҳанги ҳуҷайра барои ҳар як намуди ҳуҷайра гуногун аст.
Оқибатҳои дуршавӣ аз шароити фарҳанг, ки барои як навъи ҳуҷайра заруранд, аз ифодаи фенотипҳои ғайримуқаррарӣ то нокомии пурраи фарҳанги ҳуҷайра иборатанд.Аз ин рӯ, мо тавсия медиҳем, ки шумо бо хати ҳуҷайраҳои ба шумо таваҷҷӯҳ дошта шинос шавед ва дастурҳои барои ҳар як маҳсулоте, ки дар озмоиш истифода мебаред, ба таври қатъӣ риоя кунед.
2. Чораҳои эҳтиётӣ барои эҷоди муҳити оптимизатсияшудаи фарҳанги ҳуҷайра барои ҳуҷайраҳои шумо:
Воситаҳои фарҳангӣ ва зардоб (барои маълумоти бештар ба поён нигаред)
Сатҳи pH ва CO2 (барои маълумоти бештар ба поён нигаред)
Парвариши пластикӣ (барои маълумоти бештар ба поён нигаред)
Ҳарорат (барои маълумоти бештар ба поён нигаред)
2.1 Воситаҳои фарҳангӣ ва хуноба
Муҳити парвариш муҳимтарин қисми муҳити фарҳанг аст, зеро он маводи ғизоӣ, омилҳои афзоиш ва гормонҳои барои афзоиши ҳуҷайра заруриро таъмин мекунад ва рН ва фишори осмотикии фарҳангро танзим мекунад.
Гарчанде ки таҷрибаҳои ибтидоии фарҳанги ҳуҷайраҳо бо истифода аз васоити табиии аз иқтибосҳои бофта ва моеъҳои бадан гирифташуда анҷом дода шуданд, зарурати стандартизатсия, сифати ВАО ва афзоиши талабот боиси рушди ВАО-и ниҳоӣ гардид.Се намуди асосии васоити ахбори омма медиаи базавӣ, медиаи камшудаи хуноба ва васоити озоди хуноба мебошанд ва онҳо барои иловаи хуноба талаботи гуногун доранд.
2.1.1 Воситаи асосӣ
Муҳити фарҳанги ҳуҷайраи Gibco
Аксари хатҳои ҳуҷайра дар муҳити асосӣ, ки дорои аминокислотаҳо, витаминҳо, намакҳои ғайриорганикӣ ва манбаъҳои карбон (ба монанди глюкоза) мебошанд, хуб мерӯянд, аммо ин формулаҳои асосии ВАО бояд бо зардоб илова карда шаванд.
2.1.2 Миқдори камшудаи хуноба
Шиша бо Gibco Low Serum Medium
Стратегияи дигари коҳиш додани таъсири манфии хуноба дар таҷрибаҳои фарҳанги ҳуҷайра ин истифодаи васоити камшудаи хуноба мебошад.Муҳити камшудаи хуноба як формулаи асосии миёна мебошад, ки аз маводи ғизоӣ ва омилҳои аз ҳайвонот ҳосилшуда бой аст, ки метавонад миқдори зардоби лозимиро кам кунад.
2.1.3 Муҳити бе хуноба
Шиша бо муҳити хунобаи Gibco озод
Муҳити озод аз хуноба (SFM) истифодаи хунобаи ҳайвонотро тавассути иваз кардани хуноба бо формулаҳои мувофиқи ғизо ва гормонҳо пешгирӣ мекунад.Бисёре аз фарҳангҳои ибтидоӣ ва хатҳои ҳуҷайра дорои формулаҳои миёна аз хуноба, аз ҷумла хати истеҳсоли сафедаи рекомбинатии тухмдони чинӣ (CHO), хатҳои гуногуни ҳуҷайраҳои гибридома, хатҳои ҳашароти Sf9 ва Sf21 (Spodoptera frugiperda), инчунин барои мизбон барои истеҳсоли вирус мебошанд. (масалан, 293, VERO, MDCK, MDBK) ва ғайра. Яке аз бартариҳои асосии истифодаи муҳити бидуни зардоб ин қобилияти интихобӣ кардани муҳити барои намудҳои мушаххаси ҳуҷайраҳо тавассути интихоби маҷмӯи мувофиқи омилҳои афзоиш мебошад.Дар ҷадвали зерин афзалиятҳо ва нуқсонҳои васоити ахбори озоди хуноба оварда шудаанд.
Афзалият
Возеҳиро зиёд кунед
Фаъолияти устувортар
Тозакунии осонтар ва коркарди поёноб
Функсияи ҳуҷайраҳоро дуруст арзёбӣ кунед
Хосилнокии мехнатро зиёд кунед
Назорати беҳтари реаксияҳои физиологӣ
Муайянкунии мукаммали медиаи ҳуҷайра
Камбудӣ
Талаботи формулаи махсуси навъи ҳуҷайра
Ба тозагии баландтари реактив лозим аст
Сустшавии афзоиш
2.2.1 сатҳи рН
Аксари хатҳои ҳуҷайраҳои ширхӯрон дар pH 7.4 хуб мерӯянд ва фарқияти байни хатҳои гуногуни ҳуҷайра хурд аст.Бо вуҷуди ин, нишон дода шудааст, ки баъзе хатҳои ҳуҷайраҳои табдилёфта дар муҳити каме туршӣ (рН 7.0 - 7.4) беҳтар мерӯянд, дар ҳоле ки баъзе хатҳои ҳуҷайраҳои фибробластҳои муқаррарӣ муҳити каме сілтӣ (рН 7.4 - 7.7) бартарӣ медиҳанд.Хатҳои ҳуҷайраҳои ҳашарот ба монанди Sf9 ва Sf21 дар pH 6.2 беҳтар мерӯянд.
2.2.2 Сатҳи CO2
Муҳити афзоиш рН-и фарҳангро назорат мекунад ва ҳуҷайраҳои фарҳангро барои муқовимат ба тағирёбии рН буферӣ мекунад.Одатан, ин буферсозӣ тавассути дорои буферҳои органикӣ (масалан, HEPES) ё CO2-бикарбонат ба даст оварда мешавад.Азбаски рН-и муҳити атроф аз тавозуни нозуки гази карбон (CO2) ва бикарбонат (HCO3-) вобаста аст, тағирёбии СО2-и атмосфера рН-и муҳити атрофро тағир медиҳад.Аз ин рӯ, ҳангоми истифодаи муҳити буферӣ, ки бо буфери СО2-бикарбонат асос ёфтааст, бояд CO2-и экзогениро истифода бурд, махсусан ҳангоми парвариши ҳуҷайраҳо дар зарфҳои фарҳангии кушод ё парвариши хатҳои ҳуҷайраҳои табдилёфта дар консентратсияи баланд.Гарчанде ки аксари тадқиқотчиён одатан 5-7% СО2-ро дар ҳаво истифода мебаранд, аксари таҷрибаҳои фарҳанги ҳуҷайра одатан 4-10% CO2-ро истифода мебаранд.Бо вуҷуди ин, ҳар як миёна дорои шиддати тавсияшудаи CO2 ва консентратсияи бикарбонат барои ноил шудан ба рН ва фишори осмотикии дуруст;Барои маълумоти иловагӣ, лутфан ба дастурҳои истеҳсолкунандаи миёна муроҷиат кунед.
2.3 Парвариши пластмасса
Пластмассаҳои фарҳанги ҳуҷайра дар шаклҳо, ҳаҷмҳо ва сатҳҳои гуногун мавҷуданд, ки ба барномаҳои гуногуни фарҳанги ҳуҷайра мувофиқат мекунанд.Дастури рӯи пластикии фарҳанги ҳуҷайра ва дастури контейнери фарҳанги ҳуҷайраро дар зер истифода баред, то ба шумо пластикаи дурустро барои барномаи фарҳанги ҳуҷайраи худ интихоб кунед.
Ҳамаи пластмассаҳои фарҳанги ҳуҷайраҳои Thermo Scientific Nunc -ро бинед (пайванди таблиғотӣ)
2.4 Ҳарорат
Ҳарорати оптималии парвариши ҳуҷайра аз бисёр ҷиҳат ба ҳарорати бадани мизбон, ки аз он ҳуҷайраҳо ҷудо карда мешаванд, ва то андозае аз тағйироти анатомикии ҳарорат вобаста аст (масалан, ҳарорати пӯст аз ҳарорати мушакҳои скелетӣ пасттар бошад. ).Барои фарҳанги ҳуҷайра, аз ҳад зиёд гармӣ нисбат ба аз ҳад зиёд гармӣ мушкилтар аст.Аз ин рӯ, ҳарорат дар инкубатор одатан каме пасттар аз ҳарорати беҳтарин муқаррар карда мешавад.
2.4.1 Ҳарорати беҳтарин барои хатҳои гуногуни ҳуҷайра
Аксари хатҳои ҳуҷайраҳои одам ва ширхӯрон дар ҳарорати аз 36 ° C то 37 ° C барои афзоиши беҳтарин нигоҳ дошта мешаванд.
Ҳуҷайраҳои ҳашарот дар ҳарорати 27°С барои нашъунамои оптималӣ парвариш карда мешаванд;дар харорати паст ва аз 27°С то 30°С сусттар месабзанд.Зиёда аз 30°С, қувватнокии ҳуҷайраҳои ҳашарот паст мешавад, ҳатто агар он ба 27°С баргардад, ҳуҷайраҳо барқарор намешаванд.
Хатҳои ҳуҷайраҳои парранда барои расидан ба афзоиши ҳадди аксар 38,5 ° C лозиманд.Гарчанде ки ин ҳуҷайраҳоро дар ҳарорати 37 ° C нигоҳ доштан мумкин аст, онҳо сусттар мешаванд.
Хатҳои ҳуҷайрае, ки аз ҳайвоноти хунук хун (масалан, амфибияҳо, моҳии оби хунук) гирифта шудаанд, метавонанд ба доираи васеи ҳарорати аз 15 ° C то 26 ° C таҳаммул кунанд.
Вақти интишор: феврал-01-2023